一、流動相的選擇
1、流動相的混合
雙泵主要是在探討流動相的配比或者梯度洗脫是比較方便，知道確切的液相色譜儀條件時，建議配好后使用的話，混合比較均勻，效果較好。
2、脫氣
HPLC所用流動相必須預先脫氣，否則容易在系統內逸出氣泡，影響泵的工作。
系統中氣泡的產生：流動相本身存在，梯度淋洗混合后放出氣泡；
氣泡的影響：存在于管路中，系統壓力不穩定，實驗結果有偏差；
存在于單向閥中，易造成液體回流，流量不準確，甚至是不吸液；
存在于檢測器中，出現鬼峰，影響檢測準確性。
所以做液相對流動相的氣泡和雜質要求比較嚴格。氣泡會影響柱的分離效率，檢測器的靈敏度、基線穩定性，甚至使無法檢測。（噪聲增大，基線不穩，突然跳動）。此外，溶解在流動相中的氧還可能與樣品、流動相甚至固定相（如烷基胺）反應。溶解氣體還會引起溶劑pH的變化，對分離或分析結果帶來誤差。
溶解氧能與某些溶劑（如，甲醇、四氫呋喃）形成有紫外吸收的絡合物，此絡合物會提高背景吸收（特別是在260nm以下），并導致檢測靈敏度的輕微降低，但更重要的是，會在梯度淋洗時造成基線漂移或形成鬼峰（假峰）。在熒光檢測中，溶解氧在一定條件下還會引起淬滅現象，特別是對芳香烴、脂肪醛、酮等。在某些情況下，熒光響應可降低達95%。在電化學檢測中（特別是還原電化學法），氧的影響更大。除去流動相中的溶解氧將大大提高UV檢測器的性能，也將改善在一些熒光檢測應用中的靈敏度。
常用的脫氣方法有：加熱煮沸、抽真空、超聲、吹氦等。對混合溶劑，若采用抽氣或煮沸法，則需要考慮低沸點溶劑揮發造成的組成變化。
（1）氦氣脫氣：氦氣脫氣是很有效的脫氣方法。氦氣緩緩的通過流動相趕去溶入的空氣，如果使用得當，在10min內可除去80%～90%的溶入氣體。由于氦氣在流動相中的溶解度極低，所以用氦氣脫氣保護的流動相可以認為是一個無氣體溶解體系。其缺點是氦氣價格比較昂貴，會增加檢驗成本。一般說來有機溶劑中的氣體易脫除，而水溶液中的氣體較頑固。在溶液中吹氦是相當有效的脫氣方法，這種連續脫氣法在電化學檢測時經常使用。但氦氣昂貴，難于普及。
（2）真空脫氣：也是比較常用的脫氣方法。現在多數企業都最常用這種辦法，貯液器被抽成部分真空，溶入的氣體蒸發形成氣泡溢出，其效果僅次于氦氣脫氣。象Agileng1200液相色譜使用的是在線脫氣機。在線脫氣只適合脫完氣之后的流動相，在使用過程中的微量脫氣。
（3）超聲波脫氣：將配制好的流動相連容器放入超聲水槽中脫氣10～20min。這種方法比較簡便，又基本上能滿足日常分析操作的要求，所以，目前仍廣泛采用。這種方法只能除去30%的溶解氣體，有時還會引起氣體溶解度的增加。對氧敏感的檢測器不宜用此法。
超聲脫氣比較好，10~20分鐘的超聲處理對許多有機溶劑或有機溶劑/水混合液的脫氣是足夠了（一般500ml溶液需超聲20~30min方可），關于超聲時間問題眾說紛紜，各實驗室內5～30分鐘不等，一般來說流動相組成為無機（緩沖鹽溶液）時，5～15分鐘即可，流動相為是水和有機容積混合時，超聲時間要相對長一些，這個方法只能除去30%的溶解氣體，時間的延長不和效果成正比，且其中氣泡對色譜峰基線穩定性與信噪比有一定影響，一般來說影響不大，15min超聲即可足夠。此法不影響溶劑組成。超聲時應注意避免溶劑瓶與超聲槽底部或壁接觸，以免玻璃瓶破裂，容器內液面不要高出水面太多。
（4）加熱回流脫氣：該方法雖然效果很好，但是適用范圍較窄。對于有機溶劑或混合流動相不適合用此法，因為揮發性組分會損失掉，改變流動相的組成。
綜合來說，用真空抽濾后，再用超聲脫氣還是最常用的辦法，用氦氣的方法是效果最好的辦法，而在線脫氣本身也是真空脫氣，但它可以放到儀器上使用，是一種保證性的辦法。
A.離線（系統外）脫氣法不能維持溶劑的脫氣狀態，在你停止脫氣后，氣體立即開始回到溶劑中。在1~4小時內，溶劑又將被環境氣體所飽和。
B.在線（系統內）脫氣法無此缺點。最常用的在線脫氣法為鼓泡，即在色譜操作前和進行時，將惰性氣體噴入溶劑中。嚴格來說，此方法不能將溶劑脫氣，它只是用一種低溶解度的惰性氣體（通常是氦）將空氣替換出來。此外還有在線脫氣機。
注：
1.選用流動相配置對色譜峰影響最小
2.流動相溶解度達不到要求時，盡量選用流動相中含有的比例較大的成分，以減輕進樣對流動相的影響造成基線不穩。
3.流動相組成溶劑均達不到要求時，選取的溶劑應保證在設定波長內無紫外吸收。
二、流動相的PH
如需在一定PH值下操作，須定期測定流動相的PH值，大氣中的CO2溶解在流動相內將引起PH值的改變，特別是貯液瓶密閉不嚴時這種影響可能更大。
三、更換柱子及流動相
軟質或半軟質填料的溶脹率隨溶劑極性的變化而變化，使用新柱時應先用25~30倍柱容積的合適流動相平衡。更換流動相時，如果兩種流動相不互溶，需采用過渡溶劑使前一種流動相逐步溶解除去。例如，2、2、4-三甲基戊烷換成甲醇時，必須用乙酸已酯或其他溶劑過渡，直到標準物保留值達到穩定狀態。
（內容來源實驗與分析網）
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