一、液相色譜儀流動(dòng)相的pH值
采用反相色譜法分離弱酸(3≤pKa≤7)或弱堿(7≤pKa≤8)樣品時(shí)，通過(guò)調(diào)節(jié)流動(dòng)相的pH值，以抑制樣品組分的解離，增加組分在固定相上的保留，并改善峰形的技術(shù)稱為反相離子抑制技術(shù)。
對(duì)于弱酸，流動(dòng)相的pH值越小，組分的k值越大，當(dāng)pH值遠(yuǎn)遠(yuǎn)小于弱酸的pKa值時(shí)，弱酸主要以分子形式存在；對(duì)弱堿，情況相反。
分析弱酸樣品時(shí)，通常在流動(dòng)相中加入少量弱酸，常用50mmol/L磷酸鹽緩沖液和1%醋酸溶液；分析弱堿樣品時(shí)，通常在流動(dòng)相中加入少量弱堿，常用50mmol/L磷酸鹽緩沖液和30mmol/L三乙胺溶液。
注：流動(dòng)相中加入有機(jī)胺可以減弱堿性溶質(zhì)與殘余硅醇基的強(qiáng)相互作用，減輕或消除峰拖尾現(xiàn)象。所以在這種情況下有機(jī)胺(如，三乙胺)又稱為減尾劑或除尾劑。
(三乙胺triethylamine 氨分子中的氫原子被3個(gè)乙基取代的產(chǎn)物。分子式(CH3CH2)3N。易揮發(fā)的無(wú)色液體，有氨的氣味。熔點(diǎn)-114.7℃，沸點(diǎn)89.3℃，相對(duì)密度0.7275(20/4℃)。溶于水和乙醇、乙醚等有機(jī)溶劑。三乙胺有堿性，與無(wú)機(jī)酸能生成易溶于水的鹽類�？捎蒒，N-二乙基乙酰氨與氫化鋁鋰反應(yīng)制取，也可用乙醇胺進(jìn)行氣相烷基化反應(yīng)合成。用于制橡膠硫化促進(jìn)劑、潤(rùn)濕劑和殺菌劑等，也可用作溶劑和用于合成四級(jí)銨化合物。)
二、如何選擇緩沖液pH值
在選擇緩沖液pH值之前，應(yīng)先了解被分析物的Pka，高于或低于Pka兩個(gè)pH值單位的，有助于獲得好的、尖銳的峰，從pH公式：pH=Pka+log([A-]/[A])得知，溶液pH值高于或低于Pka兩個(gè)單位，化合物中99%以一種形式存在，而一種形式存在的化合物才能獲得好的尖銳的峰。
顯示的是它的離子形式和中性化合物的轉(zhuǎn)變，苯甲酸的Pka等于4.2，理論上由pH公式得知，當(dāng)溶液pH值等于2.2時(shí)，99%的苯甲酸以中性化合物存在，pH值等于6.2時(shí)99%的苯甲酸以離子形式存在，所以當(dāng)緩沖液pH值等于2.2時(shí)，中性化合物以羧酸形式保留于反相柱。
當(dāng)化合物只有氨基時(shí)，緩沖體系的選擇十分簡(jiǎn)單，大多數(shù)氨基化合物在pH值小于9時(shí)都被質(zhì)子化，所以所有pH值在7或更低的溶液均適合應(yīng)用，你也許會(huì)問(wèn)水的pH值大約是7，為什么還用緩沖鹽，因?yàn)榫彌_鹽有助于增加方法的可靠性，以及色譜峰的尖銳性，pH值的降低有助于氨基化合物保留的減弱，減小化合物與硅膠表面硅羥基的作用，而使峰更尖銳，任何緩沖液均可應(yīng)用于氨基化合物的分析，但我們認(rèn)為pH值等于3的磷酸鉀鹽最適合用于氨基化合物的分析。
在上面兩個(gè)例子中，pH=3的磷酸鉀鹽都能獲得良好的應(yīng)用，在一般情況下，它是含羧基和氨基化合物分析中最好的緩沖液，并且我們認(rèn)為在氨基化合物分析中鉀鹽比鈉鹽更好。
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