1、新C18柱的活化及應(yīng)用
ODS柱是一種常用的反相色譜柱，也叫C18柱，在生物化學(xué)分析工作中應(yīng)用的最為廣泛。
新柱活化，實(shí)際上是一個(gè)平衡的過程，除了用流動(dòng)相平衡外，有時(shí)候還必須用所測樣品對(duì)新柱進(jìn)行平衡，特別是測定分子量比較高的多肽，尤其重要。因?yàn)榉肿恿扛叩奈镔|(zhì)分子，擴(kuò)散速度慢，平衡所需時(shí)間也相應(yīng)較長。具體平衡方式也很簡單，多進(jìn)幾次樣品，直到峰面積和保留時(shí)間穩(wěn)定，再進(jìn)行正式進(jìn)樣測定。
如果要加快平衡時(shí)間，把前面用來平衡的進(jìn)樣樣品濃度加大，或者不等洗脫完成，連續(xù)進(jìn)樣多針。用待測物對(duì)新柱平衡，目的是將硅膠基質(zhì)填料表面具有非特異性吸附的位點(diǎn)的吸附能力飽和掉。
分子量不高的多肽一般選用常規(guī)C18柱就能測定，也有用離子交換柱、水性C18柱和Hilic親水作用柱的。
2、氨基柱柱效的恢復(fù)
氨基柱在進(jìn)酸性樣品時(shí)，很傷柱子，如使用一段時(shí)間后，柱效降低，峰形改變，如何恢復(fù)？
氨基柱測酸性樣品，應(yīng)該是用氨基柱的HILIC模式。酸的存在可能會(huì)使略帶負(fù)電荷的氨基官能團(tuán)質(zhì)子化，導(dǎo)致使用一段時(shí)間后對(duì)于某些類的分析物保留性質(zhì)有所改變或表現(xiàn)在柱效下降。
建議：用5-10倍的柱體積的含0.5-1.0％NH3的乙腈-水(50:50)溶液沖洗該柱(沖洗后當(dāng)然要再用不含堿的流動(dòng)相洗去多余氨)，之后再進(jìn)行分析這類酸性分析物時(shí)建議在流動(dòng)相中略微添加少許氨如0.1％。
3、色譜柱技術(shù)
色譜柱技術(shù)包括填料技術(shù)和裝柱技術(shù)，填料技術(shù)自不待言，填料的好壞對(duì)色譜柱分離性能和選擇性有決定性影響。裝柱技術(shù)也沒有想象中的這么簡單，不同固定相、不同粒徑、不同柱管內(nèi)徑和長度，裝柱工藝都有所不同，要裝出緊密、穩(wěn)定、均一的柱床，更多是一門藝術(shù)，需要經(jīng)驗(yàn)積累。
液相色譜柱裝填實(shí)際上是有一定技巧和程序，可能還有一些運(yùn)氣。一般使用高壓勻漿方法裝填。也就是能讓填料在溶劑內(nèi)均勻地懸浮。然后用瞬間高壓壓實(shí)，這實(shí)際上用到了不同比例的勻漿液體，和合適的壓力。壓力太大，顆粒破碎，壓力太小，塔板數(shù)少。同時(shí)壓力需要穩(wěn)定，不然分布不均，拖尾嚴(yán)重。同時(shí)還有頭上平整程度。套上套，就可以用了。
國內(nèi)和國外相比，色譜柱的差距在于：國內(nèi)公司以前都不會(huì)自己開發(fā)填料，一般買國外現(xiàn)成填料裝柱，買到的填料質(zhì)量控制權(quán)不在自己手里。另外因?yàn)檠b柱歷史短，經(jīng)驗(yàn)積累少，裝柱工藝也沒有完全達(dá)到國外水平。另外，對(duì)色譜柱性能很關(guān)鍵的基礎(chǔ)材料-----裸硅膠，國產(chǎn)的還不過關(guān)，在純度、粒徑和孔徑的均一性方面和國外產(chǎn)品相比，差距很大。
4、色譜柱的清洗和保護(hù)
柱頭污染了，就取出污染的，再裝一些填料。因?yàn)榧尤肽愎瘟诵┨盍希敲次⒂^的塔板數(shù)就少了。假如你刮得不多，僅表面，可能就是一些臟物，所以問題解決。但是今后還會(huì)有同樣問題，再刮或不小心刮，可能會(huì)影響柱效。建議還是裝一個(gè)預(yù)柱。
如果柱子取下來放置一段時(shí)間，需要做什么保護(hù)嗎？對(duì)一般的反相柱，也就是洗干凈后放到純甲醇(乙腈)或者是80%左右的甲醇(乙腈)水中，然后用堵頭塞緊柱兩頭，以免保存溶劑揮發(fā)，應(yīng)該不需要做特殊的保護(hù)。
