高效液相色譜法（high performance liquid chromatography，HPLC）是在經(jīng)典液相色譜法基礎(chǔ)上發(fā)展起來的一種新型分離、分析技術(shù)。經(jīng)典液相色譜法由于使用粗顆粒的固定相，填充不均勻，依靠重力使流動(dòng)相流動(dòng)，因此分析速度慢，分離效率低。新型高效的固定相、高壓輸液泵、梯度洗脫技術(shù)以及各種高靈敏度的檢測(cè)器相繼發(fā)明，高效液相色譜法迅速發(fā)展起來。
高效液相色譜法與經(jīng)典液相色譜法比較，具有下列主要特點(diǎn)：
1．高效由于使用了細(xì)顆粒、高效率的固定相和均勻填充技術(shù)，高效液相色譜法分離效率極高，柱效一般可達(dá)每米104理論塔板。近幾年來出現(xiàn)的微型填充柱（內(nèi)徑lmm）和毛細(xì)管液相色譜柱（內(nèi)徑0.05umm），理論塔板數(shù)超過每米105，能實(shí)現(xiàn)高效的分離。
2．高速由于使用高壓泵輸送流動(dòng)相，采用梯度洗脫裝置，用檢測(cè)器在柱后直接檢測(cè)洗脫組分等，HPLC完成一次分離分析一般只需幾分鐘到幾十分鐘，比經(jīng)典液相色譜快得多。
3．高靈敏度紫外、熒光、電化學(xué)、質(zhì)譜等高靈敏度檢測(cè)器的使用，使 HPLC 的最小檢測(cè)量可達(dá) 10-9～10-11g
4．高度自動(dòng)化計(jì)算機(jī)的應(yīng)用，使 HPLC 不僅能自動(dòng)處理數(shù)據(jù)、繪圖和打印分析結(jié)果，而且還可以自動(dòng)控制色譜條件，使色譜系統(tǒng)自始至終都在最佳狀態(tài)下工作，成為全自動(dòng)化的儀器。
5．應(yīng)用范圍廣（與氣相色譜法相比） HPLC 可用于高沸點(diǎn)、相對(duì)分子質(zhì)量大、熱穩(wěn)定性差的有機(jī)化合物及各種離子的分離分析。如氨基酸、蛋白質(zhì)、生物堿、核酸、甾體、維生素、抗生素等。
6．流動(dòng)相可選擇范圍廣 它可用多種溶劑作流動(dòng)相，通過改變流動(dòng)相組成來改善分離效果，因此對(duì)于性質(zhì)和結(jié)構(gòu)類似的物質(zhì)分離的可能性比氣相色譜法更大。
7．餾分容易收集 更有利于制備。
